高压蒸汽法

1.1.1 火焰灭菌

1.1.1.1 焚烧法

①方法：直接点燃或在焚烧炉内焚烧

②适用范围：动物尸体，病畜禽的热料，废弃物品

③优点：高温分解和深度氧化综合处理且彻底

④缺点：投资大，排烟引起二次污染

1.1.1.2 灼烧

①方法：直接用火焰灭菌

②适用范围：接种环（针）试管中金属器皿等灭菌

1.1.2 热空气灭菌（干烤法）

①方法：将物品置于干热灭菌箱内，缓慢加热空气至 160~170℃，维持 1~2h。

②适用范围：高温下不变质，不损坏不蒸发物品，如玻璃器皿，金属器械。

③注意事项：待干热灭菌的物品，不能太挤干热灭后，干热灭菌箱的温度要降至 60~70℃时才开箱门。

考：怎么做灭菌，注意事项

1.1.3 红外线灭菌

①原理：远红外线波长为 0.77~1000um 电磁波，它以辐射方式向外传播，热效应好，可达到 120℃左右的高温，且特别易被生物体如各种病菌吸收，远红外线消毒方式是采用石英电热管产生 120℃以上。

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高温来消毒

②特点：速度快，效率高，穿透力强

③适用范围：医疗器械及日常生活中常用的器皿，食具等

1.1.4 巴氏消毒法

①特点：用较低温度杀灭液体中的病原微生物或特定微生物，而仍保持物品中所需的不耐热成分不被破坏的消毒方法。

②适用范围：半乳制品，酒类等消毒

③方法（1）低温维持巴氏消毒法 LTH ：63~65℃，30min

（2）高温瞬时巴氏消毒法 HTST：71~72℃，15~30s

（3）超高温巴氏消毒法 UHT : 132℃,1~2s 迅速冷却至 10℃

（冷击法）→工业化

1.1.5 煮沸

①特点：煮沸 10~20min 可杀死所有细菌繁殖体，芽孢常需煮沸 1~3h才被杀死。若水中加入 2%的 Na2CO3或石炭酸，可提高沸点至 105℃，既可加速芽孢的死亡，又能防止金属器械生锈

猪栏，1 栏换 1 个针头→防止感染

②适用范围：手术器械，注射器，针头及食具等。

影响因素：海拔高度

1.1.6 流通蒸汽消毒法

①特点：101.3kPa（1 个大气压）100℃（气浴），15~30min可杀死细菌的繁殖体，但不能杀死芽孢和孢子。

②适用范围：常用于不耐高温的营养物品，如含糖或含血清培养基灭菌

1.1.7 流通蒸汽灭菌法

①特点：利用流通蒸汽杀灭细菌繁殖体和保温促芽孢出芽交替进行，达到完全灭菌目的。

②方法：100℃维持 30min，37℃温箱过夜，连续进行 3 次灭菌和 2 次保温不耐高温的培养基的，70~80℃维持 1h，37℃温箱过夜，连续进行 3 次灭菌和 2 次保温。

③适用范围：用于不耐高温的培养基灭菌

1.1.8 高压蒸汽灭菌法

①特点：利用高压蒸汽灭菌器进行的灭菌方法→应用最广、最有效的灭菌方法

②方法：常用 103.4kPa 的压力，在 121.3℃温度下维持15~20min 即可杀死所有微生物，达到完全灭菌目的实验室必须做的→加蒸馏水→自来水含氯腐蚀电子控件。

③适用范围：耐高温，不怕潮湿，物品的灭菌，如培养基，溶液，器皿器械，工作服的实验动物尸体等灭菌。

④注意事项：

（1）灭菌不宜过大，过紧，灭菌器内物品放着含量不应超过灭菌器柜容积的 85%。

（2）盛装物品的容器应有孔，若无，孔应将容器盖打开。

（3）布类物品放在金属，糖瓷类物品上。

（4）灭菌锅密闭前，应将冷空气充分排空（一直强调）

（5）随时观察压力及温度情况

（6）注意安全操作，每次灭菌前，应检查灭菌器。

（7）灭菌完毕后减压不要过猛，压力表回归，“0”位后才可打开盖或门。

（8）被灭菌物品应待干燥后才能取出各用。

⑤在同一温度条件湿热灭菌比干热灭菌效力大。

原因：

（1）热蒸汽对细胞成分的破坏更强小分子的存在有助于破坏维持蛋白质二维结构的氢键和其它相互作用弱键，更易使蛋白质变性。蛋白质含水量与其凝固温度成反比。